ÿþDes protéines non mitochondriales à un transfert Western. Les signaux de basket puma fenty bande de PUMA mitochondrial et de PUMA non mitochondrial ont été déterminés par densitomie à l'aide du logiciel NIH ImageJ, comme nous l'avons décrit précédemment [31]. Par la suite, l ampleur de la translocalisation mitochondriale de PUMA, appelée indice mtPUMA, a été calculée à l aide de l équation ci-dessous.Nous avons examiné un panel de huit lignées de cellules GBM et deux lignées de cellules AA pour l'expression de EGFR .

EGFRvIII et de membres pro-apoptotiques de la famille de protéines Bcl-2. Comme le montre la figure 1a, la majorité de ces lignées cellulaires co-expriment des taux élevés d'EGFR basket puma homme pas cher et de trois protéines pro-apoptotiques, à savoir PUMA, Bax et Bmf. En revanche, ces cellules expriment de faibles niveaux de Bad, Bim et Bok. Pour déterminer si EGFRvIII coexprimait également avec des protéines pro-apoptotiques similaires à l'EGFR, basket puma montante nous avons examiné trois xénogreffes de GBM portant l'EGFRvIII.

L'a-tubuline a été déterminée en tant que témoin de charge. Lignées cellulaires: 1, UW14; 2, UW281; 3, MGR1; 4, MGR2; 5, MGR3; 6, T98G; 7, U373MG; 8, UW5; 9, UW15; 10, UW19. Toutes sont des cellules GBM, à l'exception de MGR1 et UW5, qui sont des cellules AA. (B) Co-expression de EGFRvIII et de protéines pro-apoptotiques dans des xénogreffes de GBM. Trois xénogreffes de basket puma noir GBM exprimant EGFRvIII, à savoir, D-270 MG, D-317 MG et U87MG-EGFRvIII, ont été examinées pour déterminer les niveaux de EGFRvIII.

À la lumière d une étude précédente [25] montrant que ErbB4 interagit avec Bcl-2 et le fait que EGFR / EGFRvIII et ErbB4 partagent une homologie structurelle, nous avons examiné si EGFR / EGFRvIII forme un complexe avec les trois protéines pro-apoptotiques qui co-expriment récepteurs. Comme indiqué par les résultats de l'immunoprécipitation (IP) / Western blot utilisant un anticorps anti-EGFR pour IP (Fig. 1c), EGFRvIII forme un complexe avec PUMA.

Comme le montre la figure 3a, le test TUNEL a montré que l'inactivation de PUMA rend les cellules U87MG résistantes à l'apoptose (2,5%), induites par des traitements à l'anisomycine pendant basket puma noir femme 48 heures. En revanche, les cellules U87MG transfectées avec l'ARNsi contrôle subissent une apoptose significative induite par l'anisomycine (45,5%). Dans l analyse, les signaux jaunes fusionnés représentent l ADN fragmenté nucléaire.

Effets de la régulation négative de l'expression de PUMA et de l'augmentation de l'expression de EGFRvIII sur l'induction de l'apoptose dans les cellules GBM. L'étendue de l'apoptose est calculée comme suit: (nombre de noyaux apoptotiques) / (nombre total de noyaux). Dans les deux panels, 250 à 300 cellules ont été examinées dans chaque expérience et trois expériences indépendantes ont été menées pour dériver des moyennes et des écarts types.